然后5％的nds。含有％triton)封閉通透2h，孵育一抗，4℃過夜。第二天，pbs清洗三次后，孵育相應(yīng)的熒光二抗，然后再用pbs清洗三次，封片，觀察。結(jié)果見圖8，在小鼠4月齡時(shí)，通過視網(wǎng)膜冰凍組織切片染色外節(jié)抗體rhodopsin以及內(nèi)節(jié)抗體nak-atpase后發(fā)現(xiàn)，相較于野生型小鼠，gm20541基因敲除純合子小鼠(圖中sixko)視網(wǎng)膜外節(jié)明顯縮短，表現(xiàn)出了明顯退化表征。綜上，可以看出，本發(fā)明實(shí)施例以小鼠為例，通過cre-loxp基因敲除技術(shù)，在小鼠視網(wǎng)膜前體細(xì)胞中特異性敲除gm20541基因，小鼠表現(xiàn)出了視力受損，視細(xì)胞外節(jié)變短退化以及視細(xì)胞丟失等視網(wǎng)膜色素變性疾病典型表征。由此充分說明，在視網(wǎng)膜前體細(xì)胞敲除gm20541基因，可以使目標(biāo)動(dòng)物表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性疾病。視網(wǎng)膜前體細(xì)胞敲除gm20541基因的動(dòng)物，可以作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型。該疾病模型可以用于視網(wǎng)膜色素變性疾病研究等領(lǐng)域中，為該疾病的研究例如發(fā)病過程、機(jī)制以及相關(guān)藥物的篩選提供一種新的模型。雖然本發(fā)明實(shí)施例展示了在小鼠的視網(wǎng)膜前體細(xì)胞敲除gm20541基因后的表型，但本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解到，小鼠作為哺乳動(dòng)物的代表性動(dòng)物，在其他的哺乳類動(dòng)物中敲除gm20541基因或其同源基因也應(yīng)當(dāng)具有相似的表型。睪丸去勢致骨質(zhì)疏松大鼠模型。上海C57動(dòng)物模型建模

進(jìn)而使一些生長因子受體磷酸化。方法：有研究者用100μL的、、1%的DMBA的溶液涂抹于6周齡雌性C3H/Hen小鼠已剃毛的背部皮膚。在DMBA涂抹一周后，每周兩次將TPA(40nmol)施用到相同部位。模型驗(yàn)證：幾周后，小鼠背部皮膚上出現(xiàn)色素沉著斑點(diǎn)。組織學(xué)研究表明，小鼠真皮組織中色素細(xì)胞積累，某些色素細(xì)胞表現(xiàn)出嵌套的形態(tài)學(xué)模式。缺點(diǎn)：化學(xué)誘導(dǎo)黑素瘤小鼠模型缺乏與人類疾病的臨床相關(guān)性。另外，此類模型可用于研究陽光對黑色素細(xì)胞痔轉(zhuǎn)化為侵襲性的黑色素瘤的過程中起的作用。由于小鼠模型的免疫系統(tǒng)功能，因此也可以用于研究免疫策略。二、移植性模型移植模型是目前應(yīng)用多的模型。應(yīng)用：移植接種的黑色素瘤小鼠模型概括了黑色素瘤原位發(fā)展、轉(zhuǎn)移的一些特點(diǎn)，多用于抗和轉(zhuǎn)移藥物評(píng)估。1同種移植模型同種移植模型是將小鼠黑素瘤細(xì)胞接種到具有相同遺傳背景的小鼠中獲得小鼠黑素瘤模型。此模型包括ICR小鼠的Harding-Passey黑色素瘤模型、DBA小鼠的S91黑色素瘤模型、C57BL/6小鼠的B16黑色素瘤模型，其中C57BL/6小鼠的B16黑色素瘤是常用模型。優(yōu)點(diǎn)：同種移植模型具有免疫能力，可通過黑色素細(xì)胞與免疫細(xì)胞之間固有的相互作用來研究黑色素瘤與微環(huán)境的關(guān)系。上海模式動(dòng)物模型建模裸鼠皮下成瘤：前肢近腋后皮下注射細(xì)胞懸液； 裸鼠原位瘤：胰腺成瘤；尾靜脈注射成瘤。

特發(fā)性肺纖維化（IPF）小鼠模型建立【方法】1、BALB/c小鼠麻醉，6-8周齡，體重20~25g，仰臥固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，頸部去毛后酒精消毒，切開皮膚，逐層暴露氣管；2、將1mL注射器經(jīng)兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管，回抽無阻力；3、注入博萊霉素（約4~5mg/kg）再向氣管內(nèi)注入～3次，使藥物在肺部分布均勻；4、以大鼠身體長軸為中心，正反快速旋轉(zhuǎn)鼠板1～2分鐘?？p合皮膚，局部聚維酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止，室溫保持在24～25℃，待動(dòng)物自然清醒后置籠內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)。肺纖維化模型發(fā)展時(shí)間：2周可見肺系數(shù)(肺重/體重×100％)、羥脯氨酸含量明顯升高。顯微鏡下可見炎癥細(xì)胞浸潤，以淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞為主，并有肺泡壁增厚、成纖維細(xì)胞增生等Ⅱ級(jí)肺泡炎表現(xiàn)。4周可見肺間質(zhì)內(nèi)有大量散在綠染的膠原纖維，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，見有許多纖維細(xì)胞等Ⅲ級(jí)肺間質(zhì)纖維化病變。大鼠模型病理組織學(xué)與病理生理學(xué)改變與人類肺間質(zhì)纖維化相似。其病變早期表現(xiàn)為滲出性肺泡炎，炎癥細(xì)胞在病變處聚集增多。晚期為肺間質(zhì)纖維化，間質(zhì)細(xì)胞增生，基質(zhì)膠原聚集取代正常的肺組織結(jié)構(gòu)?！緳z測】組織病理切片HE染色。

視網(wǎng)膜外網(wǎng)層及其他相關(guān)細(xì)胞層出現(xiàn)相應(yīng)病理改變。因此，視網(wǎng)膜前體細(xì)胞中的gm20541基因被敲除的動(dòng)物可以作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型，用于視網(wǎng)膜色素變性性疾病研究等領(lǐng)域中，為該疾病的研究例如發(fā)病過程、機(jī)制以及相關(guān)藥物的篩選提供一種新的模型。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，敲除gm20541基因序列是指敲除gm20541基因的外顯子序列。敲除gm20541基因序列可以是敲除gm20541基因全長序列，也可以是敲除gm20541基因部分序列例如部分外顯子序列，無論敲除那種類型(部分或全長)的序列，只要是能夠在前體細(xì)胞中沉默gm20541基因的表達(dá)，使動(dòng)物表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性性疾病相應(yīng)特征即落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述外顯子序列選自第1外顯子、第2外顯子、第3外顯子中的任意一個(gè)或多個(gè)外顯子序列。在本發(fā)明公開的內(nèi)容基礎(chǔ)上，即在本發(fā)明揭示了gm20541基因與視網(wǎng)膜色素變性疾病的相關(guān)關(guān)系的前提下，本領(lǐng)域技術(shù)人員容易想到敲除gm20541基因的任意一個(gè)或多個(gè)外顯子序列，以使gm20541基因的功能受損，進(jìn)而得到類似的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型，此類方法，也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中。橄欖油聯(lián)合酒精致肝硬化門脈高壓大鼠模型。

IgA腎病小鼠模型【目的】建立IgA腎病小鼠模型，并觀察模型的生化及病理指標(biāo)特點(diǎn)。【材料】1、酸化水：鹽酸調(diào)滅菌水；2、蓖麻油+CCl4：5:1配制；3、LPS：；4、血清白蛋白BSA：800mg/kg用量，滅菌水配制；【方法】小鼠BSA+CCl4+脂多糖LPS誘導(dǎo)法1、20g小鼠牛血清白蛋白BSA(800mg/kg)隔天灌胃1次，配制160mg/ml，灌胃100ul/只，持續(xù)8周；2、同時(shí)皮下注射蓖麻油和CCl4（5:1），1次/周，持續(xù)8周；3、分別于第6、8周以（）尾靜脈注射LPS，1次/周；4、每兩周取24h尿液一次觀察尿蛋白及紅細(xì)胞；5、每日觀察精神、飲食、大小便，第9周處死，取血和腎、肝做相應(yīng)檢查；6、取尿液后2000r/min離心10min，取上清用全自動(dòng)生化儀檢測尿蛋白肌酐比值，鏡下觀察尿沉渣中有無紅細(xì)胞。在肝臟中，肝外膽道系統(tǒng)的阻塞會(huì)引發(fā)膽汁淤積和炎癥，導(dǎo)致門靜脈周圍區(qū)域的強(qiáng)烈纖維化反應(yīng)。上海C57動(dòng)物模型建模

特發(fā)性肺纖維化（IPF）小鼠模型建立。上海C57動(dòng)物模型建模

所述外顯子序列為第3外顯子序列。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，利用cre-loxp基因敲除技術(shù)敲除gm20541基因上的第3外顯子序列。上述敲除策略是采用cre-loxp敲除技術(shù)敲除gm20541基因。但在其他的實(shí)施例中，實(shí)現(xiàn)基因敲除的技術(shù)手段有很多，例如crispr/cas9技術(shù)、人工核酸酶介導(dǎo)的鋅指核酸酶技術(shù)(zinc-fingernucleases，zfn)、轉(zhuǎn)錄因子樣效應(yīng)物核酸酶技術(shù)(transceriptionactivator-likeeffectornucleases,talen)等。因此，在其他的實(shí)施例中采用crispr/cas9技術(shù)或其他的技術(shù)手段敲除gm20541基因，也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述目標(biāo)動(dòng)物為哺乳動(dòng)物。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物選自小鼠、大鼠、狗、豬、猴以及猿中的任意一種。需要說明是，本發(fā)明所述的目標(biāo)動(dòng)物并不限于上述的動(dòng)物，其他類型的哺乳動(dòng)物也是可行，無論選用何種動(dòng)物，只要是具有g(shù)m20541基因或其同源基因的動(dòng)物，均可作為本發(fā)明所述構(gòu)建方法中的目標(biāo)動(dòng)物，在其前體細(xì)胞中敲除gm20541基因，使其表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型，這也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。第二方面。上海C57動(dòng)物模型建模